マイコバクテリウム・オリギスの出現

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インド西部の野生動物保護区のシカ2頭と、インド中部の国立公園のインドバイソン1頭から、マイコバクテリウム・オリギスによる結核が検出された。 人間、家畜、野生生物の接点における結核菌群の疫学を解明するには、全国的な監視が緊急に必要である。

インドでは、Mycobacterium orygis によって引き起こされる結核 (TB) が人、牛、そしてまれに野生動物で報告されています (1-3)。 我々は、2016年2月から2020年3月にかけて疾患調査の一環として検査された85例の原因不明の死亡のうち、野生動物におけるM.オリギス関連結核の3例を報告する。この結果、化膿性気管支肺炎（n = 32）、すなわちM.オリギスによって引き起こされる結核の症例も明らかになった。結核またはウシ型結核菌 (n = 29)、害虫肺炎 (n = 9)、真菌性肉芽腫 (n = 6)、および新生物 (n = 6)。

2016年2月、インド西部グジャラート州ギルナール野生生物保護区で、放し飼いにされた大人のマダラジカ2頭（オス[症例1]、メス1頭[症例2]）が死んでいるのが発見された。 死後検査により、肺実質に埋め込まれ、乾酪化した黄白色物質を伴う不均一で多巣性の合体した淡黄色の結節と、表面結節を伴う拡大した肝臓および腸間膜リンパ節が明らかになった。 2017年1月、インド中部、マディヤ・プラデーシュ州のバンダウガル国立公園で、衰弱した成体の雄バイソン（症例3）が死んでいるのが発見された。 シカと同様に、バイソンには内臓胸膜、表層肺実質、肺リンパ節にさまざまなサイズの白い乾酪結節がありました。

原因物質を調査するために、肺、肝臓、リンパ節の組織を氷と 10% 中性緩衝ホルマリン上で収集し、組織病理学、ジール ニールセン染色、および培養分離のために処理しました。 これらの組織の組織病理学的検査により、広範な乾酪壊死を伴う大きな肉芽腫と、類上皮細胞、リンパ球、巨細胞、線維芽細胞に囲まれた複数の石灰化領域が明らかになりました（症例 3 で最も豊富）。 抗酸菌は細胞外にもマクロファージ内にも豊富に存在しました（油浸フィールドあたり 50 ～ 75 個）。 すべてのサンプルをグリセロールを含むレーベンシュタイン・ジェンセン培地とピルビン酸ナトリウムを含むレーベンシュタイン・ジェンセン培地で 3 回培養したところ、湿った滑らかで粒状のコロニーが明らかになりました (4)。 マイコバクテリウム属に特異的な 16S rRNA および MTBC のメンバーに特異的な MPB70 遺伝子を標的とするシングルチューブ マルチプレックス PCR による細菌分離株の一次スクリーニングにより、分離株が MTBC であることが確認されました (5)。 公開されているプラ​​イマーを使用して、MTBC 陽性サンプルに対してさらに PCR を実行し、異なるゲノム領域 (RD4 および RD9) の有無を確認しました (6)。 この検査では、RD9 が存在せず、RD4 が存在することが示されたため、3 つのケースすべてで結核菌、カネッティ菌、ウシ型結核菌、またはウシ型結核菌 BCG の可能性は除外されました。

関与する MTBC の正確な種と、インドで循環している家畜やヒトに影響を与える株との遺伝的類似性を決定するために、Illumina MiSeq プラットフォーム (https://www.illumina.com) でペアエンド全ゲノム配列決定を実行しました。 M. オリギスの標準的な遺伝子マーカー (RD1、RD4、および Rv044c) の存在、および RD9 および RD12 の欠如により、我々の配列が M. オリギスであることが確認されました。 我々は生成した全ゲノムデータを国立バイオテクノロジー情報センターの配列読み取りアーカイブデータベースにアクセッション番号 2 で提出しました。 SRX15482219 (ケース 1)、SRX6969199 (ケース 2)、および SRX6969201 (ケース 3)。

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形。 インドの 3 頭の野生動物 (ブラック スター、バイソン、ブルー スター、シカ) から新たに配列決定された Mycobacterium orygis 野生生物分離株と参照配列の系統発生。 外側の円は...の分布を示しています。

我々は、この研究で生成された配列を他の利用可能な M. orygis 配列と系統発生的に比較しました。 系統分岐パターンは、ケース 1 のマダラシカからの分離株が、ケース 2 のシカ分離株よりもバイソンから回収された分離株 (ケース 3) に遺伝的に近いことを示唆しています (図)。 この研究におけるすべての分離株にわたる平均ペアワイズ差は 272 でした。 分離株間では73でした。 自由生活野生動物の中から回収されたものを含む、新たに記載されたいくつかの分離株の間で観察された制限された多様性は注目に値し、今後の調​​査が必要である。

最近、南アジアでは M. orygis が人獣共通感染症の脅威として浮上しています (7)。 インドでは、人間、乳牛、野生の有蹄動物を含む複数種の症例が報告されています(1-3、7、8)。 ネパールとバングラデシュでの研究でも、放し飼いの野生動物や牛における M. オリギスの循環が明らかになり、インドの多宿主野生動物システムに M. オリギスが存在する可能性が示されています (9)。 インド出身の農場労働者からニュージーランドの牛へのM. オリギス感染の伝播に関する報告 (10) と、南アジアでのヒト患者 10 名で M. オリギスが確認されたという報告 (2) は、この地域における風土病の存在を示唆しており、緊急事態が浮き彫りになっている。ゲノム疫学調査の必要性。

私たちは、インドの放し飼いの野生動物個体群における M. orygis の循環を報告し、さまざまな絶滅危惧種が共存する地域における野生動物の保護に対する未知の脅威を示唆しています。 この研究では、M. orygis の伝播動態は不明です。 しかし、家畜、野生生物、人間の接点における共有スペースと資源が原因で、波及および波及エピソードが発生した可能性があります。 インドでは、人口爆発により森林地帯が侵食され、野生動物の生息地が縮小しており、野生動物、家畜、人間の間で病原体が伝播する脅威が増大しています。 疫学はまだ定義されていませんが、私たちの研究と以前の報告による系統解析は、M. orygis がインドの野生動物、人間、家畜集団で循環しているようであることを示しています。 世界保健機関の結核終結戦略を踏まえ、この致命的な人獣共通感染症と闘うために、One Health アプローチの傘下で全国規模のスクリーニングと継続的な監視を実施する必要があります。

シャルマ博士は、インド農業研究評議会、インド獣医研究所 (IVRI) の獣医病理学部門で博士号の取得を目指しています。 彼女の主な研究対象は、家畜、家禽、野生動物の病気の疫学と病理学です。

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この研究を実施するために必要な許可を与えてくださったインド農業研究評議会、インド獣医研究所所長、マディヤ・プラデーシュ州とグジャラート州の森林局、インド政府中央動物園庁に感謝します。

この研究は、インド政府科学技術省バイオテクノロジー局から資金提供を受けました (助成金番号 BT/ADV/牛結核/2018)。

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DOI: 10.3201/eid2903.221228

初版発行日: 2023 年 2 月 14 日

目次 – 第 29 巻、第 3 号 – 2023 年 3 月

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著者に通信を送信するには、以下のフォームを使用するか、次のアドレスに連絡してください。

カリカラン・マテシュ、ICAR インド獣医研究所野生動物センター、イザトナガル 243122、ウッタル・プラデーシュ州、インド

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